Помощь заводчикам для определения правильного дня вязки

Для определения благоприятных дней вязки с помощью влагалищных мазков необходимо иметь:
1.Микроскоп с увеличением от 80 до 300 (можно больше). Чтобы узнать увеличение микроскопа нужно умножить увеличение окуляра (например 10) на увеличение объектива (например 8). Получим 10х8=80
2.Предметные стеклышки (на которые будем наносить мазок).
3.Покровные стеклышки (которыми будем прикрывать предметные). Если не найдете покровных, можно будет прикрывать мазок сверху вторым предметным стеклом.
4.Вода без примесей (дистиллированная или купить в аптеке воду в ампулах).
5.Палочки для чистки ушей (человеческие).
6.Краситель (я использовала метиленовый синий, продается в зоомагазинах для аквариумов, а можно пользоваться штемпельной краской – продается в канцелярских товарах, эффект одинаковый). Некоторые покупают в аптеке фукорцин для прокрашивания, тогда мазки будут не синеватого, а красноватого цвета.
7.Пипетка для красителя.

Можно брать мазок, когда сука лежит (кому как удобнее). Когда берете мазок, желательно брать его с верхнего свода влагалища, тщательно вытирая его ватной палочкой.
Техника выполнения:

1. Взять чистое предметное стеклышко, хорошо вымытое и протертое досуха, положить его на чистую салфетку.
2. Взять ватную палочку, окунуть ее в дистиллированную воду, встряхнуть палочку в руке несколько раз, чтобы убрать лишнюю воду.
3. Влажной палочкой взять мазок у суки, засунув ее поглубже в петлю(сантиметра на 2-3), как бы вытирая петлю изнутри, не дотрагиваясь при этом руками (с верхнего свода).
4. Этой палочкой прокатить по предметному стеклу (при этом не сильно нажимая, чтобы слой мазка не был толстым. Визуально вы увидите на стекле мутную полоску – это и есть ваш мазок, который необходимо прокрасить.
5. На мазок нанести одну каплю красителя пипеткой, осторожно накрыть покровным стеклом, чтобы не было пузырьков воздуха.

И МОЖНО СМОТРЕТЬ В МИКОСКОП…
Какие клетки мы можем там увидеть:

1. Парабазальные (округлые с крупным ядром, небольшие по размеру)

2. Промежуточные (округлые, с более прозрачной цитоплазмой, ядро уменьшается, клетка увеличивается за счет плазмы, крупнее парабазальных)

3. Поверхностные клетки (эстральные чешуйки) - это именно то, что нас интересует. Во время плодных дней практически все клетки должны быть именно такими, промежуточные клетки могут присутствовать в единичном количестве.

Эстральные чешуйки выстраиваются в цепочки (склеивание), но у некоторых сук склеивания не происходит, но оплодотворение наступает. Клетки как бы перекрывают друг друга(подобно черепице), расположены перпендикулярно друг к другу, контуры одной клётки легко просматриваются сквозь прозрачную цитоплазму другой.

При увеличении 80-120 смотрим общий фон, при увеличении 300 и выше – рассматриваем клетки.
В период покоя мы увидим единичные клетки на фоне лейкоцитов (лейкоциты более мелкие, как брызги или песок, разбросанный по полю мазка).

Примеры мазков

День 1( В данном случае это первый день взятия мазка, а не начала течки, он совпал с окончанием проэструса). Обычно мазки начинают брать с 6-7 дня течки.
Проэструс (промежуточные клетки и большое количество эритроцитов и лейкоцитов, поверхностные клетки - единичные). Эритроциты и лейкоциты мелкие, в виде песка. На мазке лейкоциты самые мелкие, темно синего цвета. Фон мазка полупрозрачный(мутный).

При увеличении 80-120 смотрим общий фон, при увеличении 300 и выше – рассматриваем клетки.
В период покоя мы увидим единичные клетки на фоне лейкоцитов (лейкоциты более мелкие, как брызги или песок, разбросанный по полю мазка).

День 2 – Начало эструса (поверхностных клеток много, но промежуточные еще тоже в большом количестве, лейкоцитов стало заметно меньше, фон мазка очищается, становится голубым и более чистым, прозрачным)

День 3 Эструс, начало плодных дней. Зачатие вероятно. ( почти все клетки поверхностные - многоугольные, безъядерные. Промежуточные клетки и лейкоциты в небольшом количестве, фон мазка чистый, светло-голубой).

День 6 Эструс, плодные дни (почти все клетки поверхностные, лейкоциты практически исчезли, фон мазка чистый, светло-голубой, как небо). Время, идеальное для зачатия.

День 9 Эструс, окончание плодных дней ( почти все клетки поверхностные - многоугольные, безъядерные. Небольшое количество промежуточных клеток округлых, с небольшим ядром. Появляются лейкоциты в небольшом количестве, фон мазка прозрачный, светло-голубой).

День 10 Эструс, окончание плодных дней ( почти все клетки поверхностные - многоугольные, безъядерные. Ороговение усиливается. Количество лейкоцитов увеличивается, появляются промежуточные клетки. Фон мазка становится не таким прозрачным, как был).

День 11 Диэструс. Зачатие невозможно (почти все клетки промежуточные и базальные, большое количество лейкоцитов. Фон мазка становится грязным и мутным).

День 12 Диэструс, 2-й день. Зачатие невозможно (все клетки промежуточные и базальные, большое количество лейкоцитов. Фон мазка грязный и мутный).

Примеры цитологических мазков с объяснениями.

Эструс, плодные дни, все клетки поверхностные – многоугольные, фон мазка светлый, прозрачный. Клетки как бы перекрывают одна другую.
День, благоприятный для зачатия.

Диэструс, зачатие невозможно. Клетки парабазальные (с большим ядром круглые и промежуточные (с маленьким ядром). Поверхностные клетки отсутствуют, либо присутствуют в единичном числе. Большое число лейкоцитов, фон мутно-грязный. Период фертильности прошел.

Одними из признаков дней, благоприятных для вязки являются:
Изолированное расположение клеток на расстоянии друг от друга,или в виде черепицы, когда контуры одной клётки легко просматриваются сквозь прозрачную цитоплазму другой.
Светлый прозрачный фон мазка при отсутствий лейкоцитов
Клетки располагаются группами по 4-6 клеток или скоплениями.

Признаками окончания плодных дней являются:
- Постепенно начинает уменьшаться число поверхностных клеток и увеличивается число промежуточных клеток.
- Из-за изменения характера слизи и появления лейкоцитов мазок приобретает мутный, темноватый фон.
- Последующее уменьшение числа поверхностных клеток и увеличением числа промежуточных.

Ниже приведена информация по материалам книги “Английский бульдог” Бейли С. Хейнс
из серии: Библиотека Американского клуба собаководства.

“Наберитесь терпения и не торопитесь с вязкой. Лучше это сделать позже, чем раньше. Цель состоит в том, чтобы вязка произошла перед самым “выходом” суки из цикла
(до того, как в мазке вновь появятся круглые клетки с большими ядрами и лейкоциты). Если вы пропустили оптимальное для вязки время, возможно, будет не поздно вязать суку сразу же по наступлении выхода из цикла, хотя сука может и не принять кобеля при этом.

Пока сука не выйдет из цикла, вы не можете быть уверены, что провели вязку вовремя.

Если в период проэструса или вообще в течение цикла в мазке присутствует необычно большое количество лейкоцитов, у суки, вероятно имеется какая-то инфекция, хотя при этом при оптимальном для вязки периоде, мазок может выглядеть совершенно нормальным.
В то же время при наличии у суки инфекции нейтрофилы, промежуточные или парабазальные клетки часто могут появляться в неподобающие для себя сроки. “Группировка” безъядерных клеток не наблюдается, исследование вагинальных мазков становится малоэффективным.

Еще один метод состоит в том, чтобы вязать суку сразу после того, как анализ мазка засвидетельствует ее выход изцикла.

Следует обратить внимание на мазок инфицированной суки: некоторые клетки, хоть и безъядерные, но необычайно округлые. Кроме того бросается в глаза обилие лейкоцитов.
Имеется несколько типов лейкоцитов, но именно нейтрофилы чаще всего присутствуют в вагинальном мазке.
Следы лейкоцитов могут наблюдаться в период проэструса. Они появляются к концу течки - “на выходе”. Однако в период, наиболее оптимальный для вязки, лейкоцитов в мазке нет.
Эритроциты (красные кровяные клетки) могут присутствовать или отсутствовать на протяжении всего цикла и практически не влияют на результаты анализа мазка. Они очень малы по сравнению с лейкоцитами и при использовании метиленового синего практически не видны.”

Примерно третий день течки(проэструс):
Грязный фон из клеточных остатков и рваные края клеток.
По мере приближения течки к дню, оптимальному для вязки, этот грязный фон очистится, а края клеток станут резкими и четко очерченными.

След.этап(начало эструса): группировка клеток продолжается, фон очистился, клетки постепенно становятся безъядерными (но ядерные клетки еще присутствуют), некоторые из них выглядят как взаимно перпендикулярные штрихи.

На след. этапе (эструс) появляется большая скученность клеток, они практически все безъядерные. Вот с этого дня нужно вязать. (Окрашивание по Харриса-Шора, фото взяты из книги "Практическое руководство по разведению собак", Royal Canin)
Эструс (общая картинка)

Эструс (картинка при увеличении)

Диэструс (общая картинка)

Диэструс (картинка при увеличении)

Другие способы, помогающие определить готовность суки к вязке.

1. Старинный способ определения сроков овуляции от ветеринаров в полевых условиях.
берем чистое стекло и прикладываем его к петле, чтоб там отпечаталась слизь. Немного размазываем слизь по стеклу и ждем пока высохнет. если кристаллизуется, пора бежать к коблу. Если засыхает как просто грязное пятно как "от молока" например, то или еще рано или уже поздно.

2. Можно использовать "Тест-полоски "Уриглюк-1" (или любые другие) для определения уровня глюкозы в моче - для диабетиков (продаются в человеческой аптеке). На самой баночке есть цветная шкала - можно приложить к ней свою полоску и точно определить степень "зеленения"...или коричневения… Когда микроскоп показывает самое благоприятное время для вязки, окрас тест полоски идет уже на убыль. При супер зеленой полоске, по тесту мазка в микроскопе, еще как бы чуточку рановато. Т.е. тест показывает созревание яйцеклетки и, в принципе, полную готовность к вязке, но есть еще пара дней до ее выхода, а мазок именно тот самый пик выхода.
"Уриглюк представляет собой маленький тубус с плотной крышкой, там - полосочки непромокаемой бумаги с маленьким индикатором на одном из кончиков полоски. На самом тубусе – цветовая шкала, по которой проводится сравнение.
Погрузить полоску индикатором прямо «туда» на глубину 2-3 см. Дело в том, что по инструкции это дело используется для определения сахара в моче. И рекомендуют погружать в мочу на 5 – 6 сек. Т.е. предполагается, что для достоверности результата, материал индикатора должен всё же пропитаться испытуемой жидкостью. А поскольку наша жидкость гуще мочи, то надо ждать уж никак не меньше этих секунд, а то и больше (7 – 8, например). И желательно обеспечить максимальное соприкосновение индикатора и материала, что достигается именно погружением «туда». Или же, если достаточно выделений на поверхности петли, то положить полосочку индикатором прямо в них, завалив собаку на спину. Результат смотрим в течение 2-х минут.

3. Можно использовать микроскоп Арбор или обычный микроскоп для исследования кристаллизации слюны. В период, благоприятный для вязки вид слюны под микроскопом будет представлять собой листья папоротника. Слюна у собаки берется на голодный желудок.

4. Обычно течка длится 17-24 дня (в среднем 21 день). В начальной стадии (1-10 день) кровянистые выделения не прозрачны, ярко-красного цвета, капля, упавшая на пол, имеет ровные края, высыхает быстро. Промежность сильно набухшая, петля имеет вид резинового кольца, на ощупь сильно отекшая. В стадии овуляции - способности к оплодотворению (8-13 день) - выделения светлеют (цвет сока талого мяса), приобретают резкий запах (не свежей рыбы), капля, упавшая на пол, имеет вид солнышка (края имеют лучики). В этот период сука проявляет активный интерес к меткам мочи, оставленными кобелями и скулит при встрече с ними, охотно отводит в сторону хвост и подергивает вверх петлю при поглаживании спины. Петля на ощупь смягчается, пропадает отечность, кожа петли имеет вид печеного яблока, внешне петля напоминает поперечно-расположенную лодку. Если взять выделения и потереть пальцы между собой, вы убедитесь, что они имеют слизистую консистенцию. При совпадении вышеперечисленных признаков собаку можно считать готовой к спариванию, которое проводят два раза (первая вязка и через день вторая, контрольная, вязка).

5. В стадии овуляции яйцеклетки выходят недозревшими, но готовыми к оплодотворению, как правило, 48 часов спустя. В идеале вязку или искусственное осеменение следует осуществлять в течение 48 часов с момента овуляции, что позволяет большинству способных к оплодотворению яйцеклеток и сперматозоидов достичь места "встречи" (маточные трубы). Яйцеклетки с момента их созревания способны к оплодотворению в течение 2 суток (у некоторых пород эта способность, похоже, может сохраняться свыше 4 суток). Просветление истечений из петли, как правило, означает конец проэструса, но не может служить достоверным контролем овуляции (у некоторых сук, таких, как чау-чау, кровянистые выделения возможны до конца эструса).
Овуляция происходит чаще всего на 1-3 день от начала охоты (иногда на 5-7 день или даже за 2 дня до нее). Обычно созревшие фолликулы овулируют в течение суток. Однако яйцеклетки становятся способными к оплодотворению только через 2-3 дня. Общий срок жизни яйцеклетки после выхода из яичника- 5-8 дней.

Показатели для осеменения живой спермой (ветеринары системы Каниколд).

< 1 ng/ml делаем повторный анализ через 4 дня
3-4 ng/ml повторяем анализ через 1-2 дня
5-7 ng/ml (15-25 nmol) овуляции произошла, осеменяем на второй день и в следующие три дня
8-11 ng/ml (25-35 nmol) осеменяем сегодня и через день
11-19 ng/ml (35-60 nmol) осеменяем сегодня и в течение 24 часов
> 19 ng/ml (>60 nmol) осеменяем сегодня (сейчас!)

Для живой спермы:
Фертильный период для спаривания 4-10 til 20 ng/ml

Осеменение замороженной и охлажденной спермой:

5 NG/ML (15 nmol/l) инсеминация от 2.5 до 3 дней спустя
9-12 ng/ml (29 - 38 nmol/l) инсеминация на след. день
15 ng/ml (>52 nmol/l) инсеминация сегодня

Желаю всем успехов и здоровых малышей.

При подготовке статьи использованы материалы с сайтов:
www/arbl.cvmbs.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/vc/index.html
http://bulldogs-klan.clan.su/forum/5-54-1